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              恒遠生物|細胞復蘇

              更新時間:2024-03-21 點擊量:110

              細胞復蘇的原則


              快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。


              一. 實驗前準備:


              1.將水浴鍋預熱至37℃


              2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。


              3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等。


              二.取出凍存管:


              1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。


              2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。


              三.迅速解凍:


              1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。


              2.約1-2min后凍存管內液體溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。


              四.平衡離心:


              用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min 


              五.制備細胞懸液:


              1.吸棄上清液。


              2.向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。


              六.細胞計數:


              細胞濃度以5×105/ml為準。


              七.培養細胞:


              將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液時間由細胞情況而定。


              特別注意初學者常犯的錯誤:


              1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。


              2.水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。


              3.離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。


              4.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。

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