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              恒遠生物|雞二胺氧化酶(DAO)ELISA實驗說明

              更新時間:2024-03-27 點擊量:93

              檢測范圍:


              3pg/ml-150pg/ml


              使用目的:


              本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中二胺氧化酶(DAO)含量。


              實驗原理


              本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞二胺氧化酶(DAO)水平。用純化的雞二胺氧化酶(DAO)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入二胺氧化酶(DAO),再與HRP標記的二胺氧化酶(DAO)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中雞二胺氧化酶(DAO)濃度。 


              標本要求 


              1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融


              2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


              操作步驟


              1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

              120pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

              60pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

              30pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

              15pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

              7.5pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液


              2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。


              3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   


              4.配液:將30倍(48T的20倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍(48T的20倍)稀釋后備用


              5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。


              6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 


              7.溫育:操作同3。


              8.洗滌:操作同5。


              9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.


              10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。


              11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。


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